玫瑰組織培養的意義
1.快速繁殖
玫瑰有性生殖能力差，大多觀(guān)賞價(jià)值高的品種不形成種子，種子繁殖不現實(shí)。而玫瑰實(shí)生苗觀(guān)賞價(jià)值較差，因此生產(chǎn)上必須通過(guò)野薔薇扦插再嫁接進(jìn)行繁殖。利用組織培養技術(shù)可以實(shí)現玫瑰優(yōu)良品種的快速繁殖，并且能保持原有的優(yōu)良性狀不變。玫瑰組培增殖系數為４～５，半年至一年內能獲得上百萬(wàn)種苗。
2.獲得無(wú)病毒植株
玫瑰在生長(cháng)過(guò)程中，能感染一種或數種病毒或類(lèi)病毒。長(cháng)期營(yíng)養繁殖，如扦插、嫁接、分株，不僅不能脫毒，反而使病毒積累，嚴重影響玫瑰的品質(zhì)，導致玫瑰觀(guān)賞價(jià)值下降，比如花徑變小、色澤變淡、產(chǎn)花減少、斑點(diǎn)較多、花形不規則、易感染病蟲(chóng)等。通過(guò)組織培養技術(shù)，利用玫瑰莖尖脫毒后，使玫瑰的種性得到復壯，生長(cháng)勢增強，花徑增大，色澤鮮艷，抗病能力提高，產(chǎn)花量上升。
3.培育新品種
在組織培養過(guò)程中往往會(huì )發(fā)生芽變，芽變的結果導致花色變異、花的大小變異、花期變異、葉色變異、染色體數量變異等。在組織培養過(guò)程中，一旦發(fā)生芽變，準確切取變異芽，并將其繁殖成完整植株，可產(chǎn)生有特殊觀(guān)賞價(jià)值的新品種。
4.種質(zhì)資源的保存
玫瑰種質(zhì)資源豐富，按傳統方法保存種質(zhì)資源占地面積大，且資源易受人為因素和環(huán)境因素的破壞而丟失。用組培方法，用極小的空間就可長(cháng)期有效地保存玫瑰的種質(zhì)資源。
玫瑰組織培養的方法
1.外植體選取
從生長(cháng)在田間或盆栽的優(yōu)良品種植株上，選取生長(cháng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的當年生枝條的莖尖和幼莖。取材在晴天正午，并且取用植株上部的幼莖。陰雨天或靠近地面的幼莖，表面污染較為嚴重，難于消毒。玫瑰除用莖尖和幼莖做外植體外，也可以用葉片、葉柄、根、莖、原生質(zhì)體、胚、花藥、子房、花萼和花托做外植體。
2.消毒滅菌及無(wú)菌苗的建立
取玫瑰外植體，用5%～10%的次氯酸鈉浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用無(wú)菌水清洗7～10次后接種。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒滅菌完畢后，將幼莖切割成05～10厘米長(cháng)的至少帶有一個(gè)節的切段，接種于培養基中。
3.愈傷組織的誘導
Zui早報道從雜交茶香月季的莖上誘導了愈傷組織，該實(shí)驗證明在培養基中添加2，4-D或添加NAA和激動(dòng)素KT均能很快誘導出愈傷組織。隨后不同實(shí)驗以不同品種為試驗材料，從葉、葉柄、根、莖、原生質(zhì)體、合子胚、花藥、子房、花瓣、花萼、和花托成功地誘導了愈傷組織。
3.1愈傷組織的成功誘導與品種的基因型有關(guān)
2.3.2外植體類(lèi)型：不同外植體愈傷產(chǎn)生的能力不同，葉為90%，根為70%，節間為55%，花藥為19%。
3.3激素
Rout等（1991）以L(fǎng)andora為材料，在添加BA和NAA，2，4-D的MS的培養基上，外植體在接種的7～12d后，在近軸面的葉柄和中脈處產(chǎn)生愈傷，愈傷組織誘導頻率高達92%。在接種后15～20d，外植體莖切端處產(chǎn)生愈傷，誘導率為76%。生長(cháng)素種類(lèi)和濃度對愈傷產(chǎn)生能力的影響同樣很大。早期實(shí)驗多采用NAA結合BAP或BA等，近年來(lái)多采用2，4—D，并證明2，4—D是誘導愈傷的必要因素（Kintzios等，1999；Rout等，1996；vanderSalm等，1996；Vises—suwan等，1997）。進(jìn)一步研究發(fā)現2，4-D對愈傷的誘導效果依賴(lài)于月季的基因型，如2，4—D濃度從113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培種“Care-freeBeauty”的愈傷誘導頻率，但該濃度則對另一個(gè)品種“GrandGala”無(wú)影響。對于“RedSunblaze”而言，當濃度從113umol/L增加到452umol/L，則表現出愈傷的誘導率提高了，隨后當2，4—D再增加，則顯著(zhù)地降低愈傷的誘導頻率。愈傷組織在誘導愈傷組織的培養基上能得到很好繼代培養（subculture、Li等，2002）。VanderSalm等（1996）證明2，4—D對誘導Rosepersica與xanthina和Moneyway產(chǎn)生愈傷是非常必要的，進(jìn)一步添加低濃度的BA有正效應，但如BA濃度過(guò)高，則產(chǎn)生抑制作用。與以上實(shí)驗結果不同，Kintzios等（1999）則發(fā)現2，4—D對愈傷誘導有負影響作用，可能因為采用的外植體是成熟的葉片。
3.4合子胚的發(fā)育時(shí)期對愈傷的形成能力也有影響
處于心形胚的合子胚，其愈傷誘導率只有2%，子葉胚時(shí)的合子胚愈傷誘導率達到85%。
不定芽的誘導
月季的常規繁殖方式主要靠扦插、嫁接和壓條等，繁殖系數低，遠遠滿(mǎn)足不了生產(chǎn)的需要。80年代初，采取組織培養方法快速繁殖月季苗，用側芽、頂芽、并誘導生根。
增殖培養
玫瑰的增殖培養，一靠無(wú)菌苗切段繁殖，二靠誘導不定芽，形成從生苗；三靠愈傷組織形成體細胞胚或原球胚。將已長(cháng)大的月季嫩莖切成帶1～2個(gè)節的莖段，投入新鮮的增殖培養基上，5～6周進(jìn)行一次繼代增殖，增殖系數平均達4～6。在外植到培養10～15d內葉的葉原基伸長(cháng)，第二葉片葉原基可見(jiàn)；15～20d側芽伸長(cháng)；25～30d長(cháng)度達6～10mm，繼代增殖會(huì )按幾何級數增長(cháng)起來(lái)。增殖培養基可用不定芽誘導培養基，如MS+BA03～05+NAA0004～03mg/L。
壯苗與生根
壯苗培養的培養基為：MS+BA03～05+NAA001～01或MS+BA03～05+IBA03。也可以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合二為一。玫瑰組培苗增殖與壯苗需光照10～12h，光照強度2000lx，溫度24～26℃。
一般情況下，玫瑰莖段組織培養8～10d內則可生根。加入適量的活性炭有利于玫瑰生根。
煉苗與大田移栽
煉苗和大田移植是玫瑰微繁殖獲得成功的階段。組培幼苗由人為培養環(huán)境轉移到天然生長(cháng)環(huán)境中，環(huán)境條件發(fā)生巨大變化，濕度大幅度降低，溫度不恒定，光照強烈，微生物多，故需煉苗過(guò)渡。一般玫瑰微繁殖煉苗需經(jīng)過(guò)室內三天的取蓋煉苗，然后將苗從瓶中取出，洗去根部培養基，定植在珍珠巖、泥炭、蛭石或沙土中，用3～5%的多菌靈噴洗。煉苗時(shí)要注意基質(zhì)中的水分含量，水分太少，不能滿(mǎn)足苗生長(cháng)發(fā)育；水分太多，導致?tīng)€苗。煉苗中、后期要注意通氣，給予足夠的光照，其幼苗成活率可達80％以上。
玫瑰組織培養中應注的問(wèn)題———褐化現象
褐化現象是指外植體在培養過(guò)程中切口產(chǎn)生的多酚類(lèi)物質(zhì)被氧化成褐色的醌類(lèi)物質(zhì)毒害植物自身，導致培養材料褐變死亡的現象。玫瑰在組織培養中褐化現象嚴重，可采取以下措施：
1.采用適宜的外植體比如實(shí)生苗莖尖、枝條頂芽、幼胚等，在取外植體之前對母樹(shù)進(jìn)行遮光處理20～40d。
2.適宜的無(wú)基鹽分適宜的無(wú)基鹽分，降低蔗糖濃度，降低激素水平，加吸附劑05%～25%的活性炭可以減輕材料的褐變。
3.在培養基中加入抗氧化劑和其他抑制劑如有機酸、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，氨基酸，硫脲，二氨基二硫化甲酸鈉，亞硫氫酸鈉，氰化鉀，二硫蘇糖醇多氨等，可有效的抑制褐變。
4.反復轉移，降低溫度，進(jìn)行暗培養，增大培養基硬度，是控制褐常用且有效的方法。
